基因编辑技术的飞速发展, 特别是近年来CRISPR技术的广泛应用,使得人类拥有了前所未有的改变和修饰基因组的能力。CRISPR技术来源于细菌本身对抗噬菌体的“免疫系统”,这项技术利用单链引导RNA(sgRNA)和Cas9蛋白,可以在体内和体外简单、迅速、低成本实现基因编辑。利用CRISPR技术不仅可以对编码基因进行有效编辑和基因组的大规模筛选,而且还可以结合NGS对非编码RNA(ncRNA)进行功能研究。

CRISPR技术已经广泛应用于全球各个实验室,几乎可以对所有细胞系和大多数常用实验动物的遗传物质进行改造。CRISPR技术在人类遗传性疾病、病毒感染疾病和癌症的相关研究中具有广阔前景和巨大发展潜力。

哺乳动物细胞基因/基因组编辑操作流程

哺乳动物基因编辑流程

哺乳动物细胞基因/基因组编辑研究思路

1.哺乳动物细胞基因敲除(knock-out) /敲入(knock-in)

研究思路
  1. 因组定制化的
    sgRNA设计
  2. 基因组或者Panel
    范围内的基因调取
    与sgRNA设计
  1. Syno® 2.0基因合
    与载体构建平台
  2.  Syno®3.0sgRNA
    文库构建平台
  3.  多模式物种的载体
    序列设计
  1. 体外sgRNA活性验证
  2. 体内sgRNA活性验证
  1. 稳定细胞株构建
  2. 基因敲除动物模型构建

2.哺乳动物细胞非编码RNA功能研究

哺乳动物细胞非编码RNA功能研究
  1. 基因组或者Panel
    范围内的基因调取
    与pg-sgRNA设计
  1. Syno®2.0基因合成载体
    构建
    平台
  2. Syno® 3.0 sgRNA文库构建
  3. 多模式物种的载体序列设计
  1. 慢病毒文库包装
  2. NGS验证文库质量
  1. 筛选前后NGS数据对比
  2. 细胞株构建或动物模型建立

哺乳动物基因编辑服务优势

right一站式服务
泓迅科技提供从sgRNA设计、合成及活性检测,到稳定细胞株或动物模型构建和筛选的整体解决方案

right专利的技术平台
拥有专利的sgRNA设计软件,能够高效准确提供多物种序列设计方案

rightsgRNA文库合成
拥有专利的Syno® 3.0芯片合成平台,文库构建覆盖率95%以上

right高通量功能筛选平台
可提供全基因组文库高通量筛选,可平行分析大量细胞的基因功能,鉴定相关的候选基因

哺乳动物细胞基因/基因组编辑应用案例

【泓迅案例】 构建人类sgRNA文库

【应用案例1】哺乳动物细胞CRISPR-Cas9的基因编辑

【应用案例2】 CRISPR-Cas9系统用于lncRNA基因的高通量功能筛选

参考文献
Ran, F.A., et al., Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nature Protocols, 2013. 8(11): p. 2281-2308