CRISPR-Cas9技术敲除酵母菌ADE1基因

【背景】

利用CRISPR-Cas9技术编辑酵母菌中的一个920bp的ADE1基因。ADE1是腺嘌呤合成相关基因,如果ADE1失活,则细胞将会积累红色色素,呈现红色菌落。

【方法】

  1. 质粒构建
  2. sgRNA活性检测
  3. 挑选活性较高的sgRNA进行基因组定点编辑
  4. 利用基因功能变化、表性变化和测序等方法检测基因定点修饰结果。

【结论】

  1. 从颜色表型变化得知,酵母菌落变成红色菌落,可知ADE1成功敲除(图1);
  2. 阳性克隆菌落

  3. 测序结果显示,转化子的ADE1基因缺失了21个碱基,被成功编辑(图2)。
  4. 测序结果

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