CRISPR sgRNA文库合成

研究基因在代谢通路或某些特定疾病发生过程中的功能,对于疾病机理研究及药物研发具有非常重要的意义。新一代基因编辑技术CRISPR以其操作简单和通用的独特优势,成为开展正向遗传学筛选实验强有力的工具。利用CRISPR技术建立可能与某类功能相关的突变体库,通过功能性筛选和富集、PCR扩增及深度测序分析,确认与这类功能相关的基因。

泓迅科技利用独创的“GPS”(Genotype,Phenotype,Synotype)平台,提供基于CRISPR sgRNA文库的一站式基因功能筛选服务。我们专利的Syno®合成技术平台,可以快速高效地实现sgRNA文库构建,并包装成慢病毒混合文库后转染细胞。结合高通量/高内涵筛选平台,利用控制细胞存活、结合免疫染色、流式细胞术等手段筛选得到所需细胞,最终通过测序等方法推断出发挥作用的靶基因。

CRISPR sgRNA文库合成技术路线图

CRISPR-Cas9 sgRNA文库合成

CRISPR基因编辑平台一体化服务流程

CRISPR基因编辑平台一体化服务流程

泓迅CRISPR sgRNA文库构建服务优势

  1. 丰富的全基因组sgRNA设计经验,覆盖几十种模式物种,亦可针对客户需求的模式物种进行sgRNA设计。
  2. 根据客户自身需求选择sgRNA表达载体,并提供转染级质粒。
  3. 行业内领先的QC指标。
  4. 提供从sgRNA设计、文库构建到慢病毒包装的一站式服务。

CRISPR sgRNA文库合成和构建服务

泓迅科技CRISPR一站式基因编辑服务包括sgRNA序列设计、文库构建、NGS验证、慢病毒包装等,为客户提供基因功能筛选全套解决方案。

 

服务项目 服务详情 周期
sgRNA设计 针对特定基因分类进行gRNA序列设计
每个基因设计3-6条sgRNA
1-2周
芯片合成 将所设计的所有sgRNA及阴性对照合成在一张芯片上 3-4周
sgRNA文库构建 将sgRNA构建到客户的目标载体上 2-3周
文库质粒大抽 根据发货量进行转染级质粒抽提 1周
文库质检及NGS验证(可选)
  1. 克隆覆盖倍数必须大于100倍
  2. 克隆正确率大于70%
  3. NGS验证的文库正确率大于80%
  4. NGS验证文库的均一性指标小于10
2-3周
病毒包装(可选) 慢病毒包装,病毒滴度: 108TU/ml 2-3周
总计 11-16周

 

CRISPR sgRNA文库构建与筛选应用实例

【经典案例】已知药物功能筛选其耐药靶点的方案:

Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)

  1. 明确该药物功能及其致死工作浓度。
  2. 构建 CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文库并侵染细胞,构建整合CRISPR-Cas9 gRNA的细胞混合克隆。
  3. 筛选:高浓度药物短期内持续作用细胞混合克隆,成活的细胞即为产生耐药性的细胞,其耐药性的产生原因是 CRISPR-Cas9 gRNA导致的基因改变。
  4. 存活的细胞通过二代测序,比对得到gRNA 信息,从而推断出起作用的基因靶点。
CRISPR-Cas9 sgRNA文库合成 CRISPR-Cas9 sgRNA文库合成

CRISPR sgRNA文库合成订购与咨询

您可以通过以下任意方式下单或咨询,工作时间我们保证在1小时内给您反馈:

  1. Email:请将您的需求发送到support@synbio-tech.com
  2. 电话订购:工作日您可以拨打免费热线4000-973-630(按1);休息日您可直接拨打18262686586,联系我们经验丰富的工程师
  3. 在线咨询:您有任何技术问题均可与我们进行网页在线互动