CRISPR-Cas9 sgRNA文库合成

研究基因在代谢通路或某些特定疾病发生过程中的功能,对于疾病机理研究及药物研发具有非常重要的意义。新一代基因编辑技术CRISPR-Cas9以其操作简单和通用的独特优势,成为开展正向遗传学筛选实验强有力的工具。利用CRISPR-Cas9技术建立可能与某类功能相关的突变体库,通过功能性筛选和富集、PCR扩增及深度测序分析,确认与这类功能相关的基因。

泓迅科技利用独创的“GPS”(Genotype,Phenotype,Synotype)平台,提供基于CRISPR-Cas9 sgRNA文库的一站式基因功能筛选服务。我们专利的Syno®3.0 合成技术平台,可以快速高效地实现sgRNA文库构建,并包装成慢病毒混合文库后转染细胞。结合高通量/高内涵筛选平台,利用控制细胞存活、结合免疫染色、流式细胞术等手段筛选得到所需细胞,最终通过测序等方法推断出发挥作用的靶基因。

CRISPR-Cas9 sgRNA文库合成技术路线图:

CRISPR-Cas9 sgRNA文库构建与筛选技术路线图

CRISPR-Cas9 sgRNA文库构建与筛选技术路线图

CRISPR-Cas9 sgRNA文库合成服务流程:

sgRNA文库构建与筛选服务流程

sgRNA文库构建与筛选服务流程

泓迅sgRNA文库构建服务优势:

  1. 泓迅科技专利的Syno®3.0DNA合成技术平台,使sgRNA文库合成的价格降低
  2. 采用慢病毒转染系统,有效提高sgRNA转染效率
  3. 丰富的筛选平台:控制细胞存活、结合免疫染色、流式细胞术等多种筛选方法
  4. 为客户提供从CRISPR-Cas9 sgRNA文库设计、合成、慢病毒包装到筛选的一站式解决方案。

CRISPR-Cas9 sgRNA文库构建与筛选应用实例:

【经典案例】已知药物功能筛选其耐药靶点的方案:

Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)

  1. 明确该药物功能及其致死工作浓度。
  2. 构建 CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文库并侵染细胞,构建整合CRISPR-Cas9 gRNA的细胞混合克隆。
  3. 筛选:高浓度药物短期内持续作用细胞混合克隆,成活的细胞即为产生耐药性的细胞,其耐药性的产生原因是 CRISPR-Cas9 gRNA导致的基因改变。
  4. 存活的细胞通过二代测序,比对得到gRNA 信息,从而推断出起作用的基因靶点。

sgRNA文献1
CRISPR-Cas9 sgRNA文库构建与筛选服务内容:

泓迅CRISPR-Cas9 sgRNA文库及筛选服务包括CRISPR-Cas9 sgRNA文库构建、慢病毒包装、高通量/高内涵筛选等,利用我们先进的合成及筛选技术平台,为客户提供基于CRISPR-Cas9技术的基因功能筛选全套解决方案。

 

服务项目 内容 周期 价格 交付形式
人源 CRISPR-Cas9 sgRNA 慢病毒文库 约 21,000 个基因,每个基因对应 6 条 sgRNA 咨询 咨询 慢病毒毒液
-80 度储存
CRISPR-Cas9 sgRNA文库定制 可定制针对特定基因分类的gRNA文库,包括全基因组文库、 lncRNA 文库、细胞凋亡、细胞增殖、信号通路、离子通道、核受体相关等文库 咨询 咨询 sgRNA冻干质粒
测序报告
sgRNA文库慢病毒包装 根据客户要求设计若干个基因的sgRNA,每个基因6条sgRNA,混合包装慢病毒。 咨询 咨询 慢病毒毒液
sgRNA文库筛选 利用控制细胞存活,结合免疫染色、流式细胞术流式等手段得到的筛选后的细胞 咨询 咨询 筛选报告及原始测序结果

 

CRISPR-Cas9 sgRNA文库合成订购与咨询

您可以通过以下任意方式下单或咨询,工作时间我们保证在1小时内给您反馈:

  1. Email:请将您的需求发送到support@synbio-tech.com
  2. 电话咨询:您可以直接拨打免费热线4000-973-630转803联系我们经验丰富的工程师
  3. QQ咨询:任何技术问题均可与我们在线互动,泓迅科技官方企业QQ:4000-973-630