免疫组库(Immune Repertoire，IR)是指在任何指定时间，某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。
人体淋巴细胞主要包括T细胞、B细胞。B细胞约占外周淋巴细胞总数的20%，其主要功能是产生抗体介导体液免疫应答。B细胞抗原受体((B cell receptor， BCR)是B细胞识别抗原的一种膜表面免疫球蛋白(SmIg)，具有抗原结合特异性。BCR由两条重链和两条轻链连接而成，其中重链分为可变区(V区)、恒定区(C区)、跨膜区及胞质区；轻链则只有V区和C区。V区由VH和VL两个结构域组成，它们各由三个互补决定区（CDR1、CDR2和CDR3）组成，CDR的氨基酸组成和排列顺序呈现高度多样性，在同一个体内，可高达109～1012，构成容量巨大的BCR库，赋予个体识别各种抗原、产生特异性抗体的巨大潜能，这三个CDR均参与对抗原的识别，共同决定BCR的抗原特异性。
T细胞主要功能是介导细胞免疫。T细胞抗原受体(T cell receptor，TCR)是T细胞特异性识别和结合抗原肽-MHC分子的分子结构，大多数TCR由α和β肽链组成，少数T细胞的TCR由γ和δ肽链组成。每条肽链又可分为可变区（V区），恒定区（C区），跨膜区和胞质区等几部分，而α和β两条肽链的V区（Vα、Vβ）又各有三个高变区CDR1、CDR2、CDR3，其中以CDR3变异最大，直接决定了TCR的抗原结合特异性。TCR的CDR3由V、D、J三个基因编码，在淋巴细胞的成熟过程中，通过V、D、J基因的重排形成了各种重组序列片段，再加上DNA碱基的SNP、Indel突变形成了T细胞的多样性。
免疫组库测序（Immuno-Seq）是以 T/B 淋巴细胞为研究目标，以5’RACE技术扩增决定B细胞受体（BCR）或T细胞受体（TCR）多样性的互补决定区（CDR区），结合高通量测序技术，全面评估免疫系统的多样性。Immuno-Seq技术可以观察和分析T细胞和B细胞，具有较高的测序深度和特异性。在疾病监控，抗体生产，疫苗研究，健康体检等领域有广泛的应用。
抗体组库服务优势：
- 采用RACE技术和专门优化的PCR扩增体系与程序，降低免疫组库中基因扩增偏向性
- 多样化的NGS分析平台
- 极高的成功率与快速交付速度
- 完备的生物信息学分析，深度挖掘高价值信息
抗体组库应用方向：
- 免疫组库或抗体组库多样性分析表征健康状况
- 示踪抗原特异性抗体发育过程，开发人源化抗体
- 评价疫苗保护性能
抗体组库服务内容：
| 客户提供 | 交付内容 | 发货周期 | 价格 |
|---|---|---|---|
| 1-2 ml血液或提取的高质量RNA | 1. NGS测序数据
2. 生物信息学数据分析结果 |
6-8周 | 咨询 |
泓迅经典案例：
免疫组库测序及生信分析
- 文库构建
- 文库质检
- 文库测序
- 数据分析
泓迅科技对RNA提取后经5’RACE反转录并扩增建库。
文库构建完成后，我们使用 Qubit2.0 Fluorometer 进行初步定量，稀释文库后使用 Agilent 2100 bioanalyzer 对文库进行insert size检测。符合预期后，利用Q-PCR对文库有效浓度进行准确定量（文库有效浓度高于2nM），以确保文库质量。
检测合格后将不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求，混样后进行 Illumina Miseq/HiSeq 测序。在flow cell 中加入四种荧光标记的 dNTP、DNA 聚合酶以及接头引物进行扩增；在每一个测序簇延伸互补链时，捕获新加入每一个dNTP后就释放出来的对应荧光信号，并通过专业软件将光信号转化为测序峰，从而获得待测片段的序列信息。
测序数据的质量评估
| • Per base sequence quality | • Per Sequence Quality Scores |
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| • Per Base Sequence Content | • Per Base GC Content |
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| • Per Sequence GC Content | • Per Base N Content |
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| • Sequence Length Distributionreads | • Duplicate Sequences |
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