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A:常规引物150nt以下;修饰引物140nt;ssDNA可以合成4K;RNA合成到110nt;基因合成相关服务,目前已完成的最长是24K,在构建几个30K的基因。
(1) 一般PCR扩增60base PAGE plus/60base PAGE
(2) 诊断PCR扩增 40base PAGE plus
(3) DNA测序20base左右PAGE plus
(4) 亚克隆,点突变等根据实验要求定PAGE plus, PAGE,HPLC
(5) 基因构建(全基因合成)根据实验要求定PAGE plus,PAGE
(6) 反义核酸根据实验要求定PAGE-plus PAGE
(7) 修饰引物根据实验要求定PAGE,HPLC
此外, SIMA与HEX的颜色是一致的,FITC与FAM的颜色是一致的
A:例FAM、VIC、生物素、CY5、TXR等修饰。
A:一般两端都带修饰的引物会提供质谱报告,其他服务都不包含质谱报告。
(1) 干燥制品很稳定,常温下数个月无问题。但为保证万无一失,放置于-20℃保存为好。
(2) 溶解后的溶液DNA短期内(1-2周)使用可放置在4℃下保存,长期保存请放置于-20℃。避免反复冻融,液体可分装成多份保存。(溶解DNA时,请注意使用无菌、无核酸酶的水或TE Buffer)。
(3) 荧光标记引物请避光保存。
300余种。
根据实验目的确定。以20个碱基左右引物为例:常规PCR扩增,可选择5 nmol(约合1 OD),可做200次50 μl标准PCR反应;基因拼接或退火后做连接,可选择5 nmol(约合1 OD)。
用紫外分光光度计在260 nm波长测定溶液的吸光度来定量,测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2-0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,取部分溶液稀释到1 ml并在1 ml标准比色皿中测定其吸光度,即为所测体积的OD值,进而可以计算出母液的OD值。
泓迅发货的Oligo产品,发货管标签及COA报告均已定量,且已给出建议加水量,以方便客户实验,可以直接参照报告数值,计算获得浓度等各参数。
(1) 引物和模板是否配对,检查引物3’端15bp碱基是否与模板序列完全匹配;
(2) 引物本身是否有发夹结构或高GC,poly结构等;
(3) PCR反应试剂或PCR仪是否能正常工作;
(4) PCR反应条件是否合适;
(5) 对照是否正常扩增。