CRISPR-Cas9是目前操作最简便、耗时最短的基因编辑技术,已广泛应用于多种物种的基因编辑[1]。CRISPR-Cas9的应用形式通常是构建一个含有特定物种内源性启动子并连接Cas9基因和sgRNA的质粒,并将其转入细胞或体内表达。然而,质粒的构建和验证过程繁琐,耗费大量的实验时间;并且质粒转入细胞或体内后,其降解需要一段时间,这可能会对后续实验产生影响。

为提高CRISPR-Cas9实验效率,保障实验效果,泓迅科技推出即用型sgRNA合成服务,我们可以完成sgRNA 靶位点的设计、sgRNA DNA模板的合成、sgRNA体外转录以及sgRNA的纯化,为客户提供可转入动物细胞并直接发挥作用的sgRNA。泓迅科技即用型sgRNA为您省去了质粒构建过程,消除滞留质粒对后续实验的潜在影响,节约实验时间。目前,体外转录的sgRNA已成功的对斑马鱼[2],小鼠[3]以及丝状真菌[4]等物种中的基因进行了准确的编辑。

此外,我们公司设计3条人和大鼠通用的negative control sgRNA (Syno® negative control sgRNA1,Syno® negative control sgRNA2,Syno® negative control sgRNA3),这3条negative control sgRNA不能靶向人和大鼠的基因序列,可以用作CRISPR/Cas9基因编辑的阴性对照实验。

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成服务优势:

  1. 一站式服务:可以提供从sgRNA靶位点设计到高纯度即用型sgRNA获取的全部过程
  2. 周期短:最快3个工作日交付产量可达20ug
  3. 方便快捷:即用型sgRNA可直接注射或转染细胞进行基因编辑实验

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成泓迅案例:

泓迅科技CRISPR-Cas9 sgRNA设计中心针对小鼠的多个基因各设计了8个sgRNA,然后进行体外sgRNA转录实验,实验周期短至2天,sgRNA制备量为10-20ug,可以极快地满足相关细胞学实验的一般需求。

实验流程:

一步法合成gRNA DNA模板

一步法合成gRNA DNA模板

grna-dna

实验结果:

  1. 将gRNA DNA模板平连至pUC57载体测序,比对结果与设计序列一致。如图1所示。
  2. 图1.平连结果与设计序列比对图

    图1.平连结果与设计序列比对图

  3. 将通过体外转录得到的sgRNA在2%的琼脂糖中进行电泳,可以看到清晰条带。如图2所示。
  4. 图2. sgRNA琼脂糖凝胶电泳图

    图2. sgRNA琼脂糖凝胶电泳图

  5. 我们对其中一条sgRNA序列进行验证,首先将sgRNA逆转录获得cDNA,设计sgRNA扩增引物,经过PCR反应获得sgRNA的DNA序列;其次将DNA序列平连至pUC57载体进行测序,结果显示sgRNA序列正确。如图3所示。
  6. 图3. sgRNA序列验证琼脂糖凝胶电泳图

    图3. sgRNA序列验证琼脂糖凝胶电泳图

    注:1PCR结果的模板是sgRNA 逆转录cDNA;2PCR结果的模板是经DNaseI处理的sgRNA;3PCR结果的模板是体外转录的DNA模板

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成服务周期及价格:


服务名称 产品/服务内容 交付周期 交付项目 价格
即用型sgRNA合成
  1. sgRNA设计
  2. DNA模板合成
  3. 体外转录sgRNA及纯化
  1. <10条,5个工作日
  2. 2.10-20条,10个工作日
  3. >20条,咨询
sgRNACOA文件 询价
Syno® negative control sgRNA
  1. negative control sgRNA
  2. 体外转录sgRNA及纯化
3条,5个工作日 3条Syno® negative control sgRNA 询价

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成订购与咨询:
您可以通过以下任意方式下单或咨询,工作时间我们保证在1小时内给您反馈:

  1. Email:请将您的需求发送到support@synbio-tech.com
  2. 电话咨询:您可以直接拨打免费热线4000-973-630转803联系我们经验丰富的工程师
  3. QQ咨询:任何技术问题均可与我们在线互动,泓迅科技官方企业QQ:4000-973-630

参考文献:

[1]Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, Hauer M, Doudna JA, Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity [J]. Science. 2012,337(6096):816-821.
[2]Xiao A, Wang Z, Hu Y, et al. Chromosomal deletions and inversions mediated by TALENs and CRISPR/Cas in zebrafish [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(14):e141.
[3]Fujii W, Kawasaki K, Sugiura K, Naito K. Efficient generation of large-scale genome-modified mice using gRNA and CAS9 endonuclease [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(20):e187.
[4]Liu R, Chen L, Jiang Y, Zhou Z, Zou G. Efficient genome editing in filamentous fungus Trichoderma reesei using the CRISPR/Cas9 system. Cell Discovery. 2015.7.