CRISPR-Cas9是目前操作最简便、耗时最短的基因编辑技术,已广泛应用于多种物种的基因编辑[1]。CRISPR-Cas9的应用形式通常是构建一个含有特定物种内源性启动子并连接Cas9基因和sgRNA的质粒,并将其转入细胞或体内表达。然而,质粒的构建和验证过程繁琐,耗费大量的实验时间;并且质粒转入细胞或体内后,其降解需要一段时间,这可能会对后续实验产生影响。
为提高CRISPR-Cas9实验效率,保障实验效果,泓迅科技推出即用型sgRNA合成服务,我们可以完成sgRNA靶位点的设计、sgRNA DNA模板的合成、sgRNA体外转录以及sgRNA的纯化,为客户提供可转入动物细胞并直接发挥作用的sgRNA。泓迅科技即用型sgRNA为您省去了质粒构建过程,消除滞留质粒对后续实验的潜在影响,节约实验时间。目前,体外转录的sgRNA已成功的对斑马鱼[2]、小鼠[3]以及丝状真菌[4]等物种中的基因进行了准确的编辑。
此外,我们公司设计3条人和大鼠通用的negative control sgRNA (Syno® negative control sgRNA1,Syno® negative control sgRNA2,Syno® negative control sgRNA3),这3条negative control sgRNA不能靶向人和大鼠的基因序列,可以用作CRISPR/Cas9基因编辑的阴性对照实验。
即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成服务优势:
- 一站式服务:可以提供从sgRNA靶位点设计到高纯度即用型sgRNA获取的全部过程
- 周期短:最快3个工作日交付产量可达20ug
- 方便快捷:即用型sgRNA可直接注射或转染细胞进行基因编辑实验
即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成泓迅案例:
泓迅科技CRISPR-Cas9 sgRNA设计中心针对小鼠的多个基因各设计了8个sgRNA,然后进行体外sgRNA转录实验,实验周期短至2天,sgRNA制备量为10-20ug,可以极快地满足相关细胞学实验的一般需求。
实验流程:

一步法合成gRNA DNA模板

实验结果:
- 将gRNA DNA模板平连至pUC57载体测序,比对结果与设计序列一致。如图1所示。
- 将通过体外转录得到的sgRNA在2%的琼脂糖中进行电泳,可以看到清晰条带。如图2所示。
- 我们对其中一条sgRNA序列进行验证,首先将sgRNA逆转录获得cDNA,设计sgRNA扩增引物,经过PCR反应获得sgRNA的DNA序列;其次将DNA序列平连至pUC57载体进行测序,结果显示sgRNA序列正确。如图3所示。 注:1PCR结果的模板是sgRNA 逆转录cDNA;2PCR结果的模板是经DNaseI处理的sgRNA;3PCR结果的模板是体外转录的DNA模板
即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成服务周期及价格:
服务名称 | 产品/服务内容 | 交付周期 | 交付项目 | 价格 |
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即用型sgRNA合成 |
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sgRNA COA文件 | 询价 |
Syno® negative control sgRNA |
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3条,5个工作日 | 3条Syno® negative control sgRNA | 询价 |
即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成订购与咨询:
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参考文献:
[1]Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, Hauer M, Doudna JA, Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity [J]. Science. 2012,337(6096):816-821.
[2]Xiao A, Wang Z, Hu Y, et al. Chromosomal deletions and inversions mediated by TALENs and CRISPR/Cas in zebrafish [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(14):e141.
[3]Fujii W, Kawasaki K, Sugiura K, Naito K. Efficient generation of large-scale genome-modified mice using gRNA and CAS9 endonuclease [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(20):e187.
[4]Liu R, Chen L, Jiang Y, Zhou Z, Zou G. Efficient genome editing in filamentous fungus Trichoderma reesei using the CRISPR/Cas9 system. Cell Discovery. 2015.7.