CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于多物种、多领域的研究,使细胞和生物体的基因组编辑更加高效。将sgRNA送入细胞的传统方法是通过质粒转染和慢病毒感染,两者都存在基因插入和免疫反应的风险。目前,将Cas9和sgRNA形成的核糖核蛋白(RNP)直接转移到细胞中的方法具有更安全、更快速、脱靶效应更低、编辑效率更高的优点。这已逐渐成为使用 CRISPR/Cas9 技术的一种更有效的方式。

泓迅科技专业的合成技术可提供基于化学合成及体外转录两种策略的即用型sgRNA合成服务,为基因编辑实验者提供多样的解决方案。

· CRISPR-Cas9 sgRNA化学合成

使用化学合成策略的sgRNA合成服务提供100%正确的序列和所需的化学修饰,合成的sgRNA稳定性高,毒性低,编辑效率高。

图1. Cas9-sgRNA复合物 图2. sgRNA的二级结构


服务优势

  1. 高效:对sgRNA进行化学修饰,提高体内的稳定性和编辑效率。
  2. 良好的稳定性:规范的质量控制,确保批次间的一致性和可追溯性。
  3. 安全:避免将外源DNA整合到细胞和免疫反应中的风险。
  4. 方便:即用型sgRNA,包含crRNA和tracrRNA的序列和功能,无需退火。

服务详情

长度(nt) 合成规格(OD) 修饰 纯化方法 服务周期
95-105 1-10 2’-OMe
Phosphorothioate
HPLC 7-10个工作日

交付内容

  1. 冻干RNA
  2. COA文件

· CRISPR-Cas9 sgRNA 体外转录

泓迅科技还可提供从sgRNA DNA模板合成、sgRNA体外转录及纯化一整套服务,为客户提供可转入动物细胞并直接发挥作用的sgRNA产品。目前,体外转录的sgRNA已成功的对斑马鱼、小鼠以及丝状真菌等物种中的基因进行了准确的编辑。

服务优势

  1. 一站式服务:可以提供从sgRNA靶位点设计到高纯度即用型sgRNA获取的全部过程。
  2. 周期短:最快3个工作日交付产量可达20 μg。
  3. 方便快捷:即用型sgRNA可直接注射或转染细胞进行基因编辑实验。

服务详情

服务名称 产品/服务内容 交付项目
即用型sgRNA合成 sgRNA设计
DNA模板合成
体外转录sgRNA及纯化
sgRNA和COA文件

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成泓迅案例:

泓迅科技CRISPR-Cas9 sgRNA设计中心针对小鼠的多个基因各设计了8个sgRNA,然后进行体外sgRNA转录实验,实验周期短至2天,sgRNA制备量为10-20ug,可以极快地满足相关细胞学实验的一般需求。

实验流程:

一步法合成gRNA DNA模板

一步法合成gRNA DNA模板

grna-dna

实验结果:

  1. 将gRNA DNA模板平连至pUC57载体测序,比对结果与设计序列一致。如图1所示。
  2. 图1.平连结果与设计序列比对图

    图1.平连结果与设计序列比对图

  3. 将通过体外转录得到的sgRNA在2%的琼脂糖中进行电泳,可以看到清晰条带。如图2所示。
  4. 图2. sgRNA琼脂糖凝胶电泳图

    图2. sgRNA琼脂糖凝胶电泳图

  5. 我们对其中一条sgRNA序列进行验证,首先将sgRNA逆转录获得cDNA,设计sgRNA扩增引物,经过PCR反应获得sgRNA的DNA序列;其次将DNA序列平连至pUC57载体进行测序,结果显示sgRNA序列正确。如图3所示。
  6. 图3. sgRNA序列验证琼脂糖凝胶电泳图

    图3. sgRNA序列验证琼脂糖凝胶电泳图

    注:1PCR结果的模板是sgRNA 逆转录cDNA;2PCR结果的模板是经DNaseI处理的sgRNA;3PCR结果的模板是体外转录的DNA模板

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成订购与咨询:
您可以通过以下任意方式下单或咨询,工作时间我们保证在1小时内给您反馈:

  1. Email:请将您的需求发送到support@synbio-tech.com
  2. 电话订购:工作日您可以拨打免费热线4000-973-630(按1);休息日您可直接拨打18262686586联系我们
  3. 在线咨询:您有任何技术问题均可与我们进行网页在线互动

参考文献:

[1]Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, Hauer M, Doudna JA, Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity [J]. Science. 2012,337(6096):816-821.
[2]Xiao A, Wang Z, Hu Y, et al. Chromosomal deletions and inversions mediated by TALENs and CRISPR/Cas in zebrafish [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(14):e141.
[3]Fujii W, Kawasaki K, Sugiura K, Naito K. Efficient generation of large-scale genome-modified mice using gRNA and CAS9 endonuclease [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(20):e187.
[4]Liu R, Chen L, Jiang Y, Zhou Z, Zou G. Efficient genome editing in filamentous fungus Trichoderma reesei using the CRISPR/Cas9 system. Cell Discovery. 2015.7.