抗体组库

免疫组库(Immune Repertoire,IR)是指在任何指定时间,某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。

人体淋巴细胞主要包括T细胞、B细胞。B细胞约占外周淋巴细胞总数的20%,其主要功能是产生抗体介导体液免疫应答。B细胞抗原受体((B cell receptor, BCR)是B细胞识别抗原的一种膜表面免疫球蛋白(SmIg),具有抗原结合特异性。BCR由两条重链和两条轻链连接而成,其中重链分为可变区(V区)、恒定区(C区)、跨膜区及胞质区;轻链则只有V区和C区。V区由VH和VL两个结构域组成,它们各由三个互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)组成,CDR的氨基酸组成和排列顺序呈现高度多样性,在同一个体内,可高达109~1012,构成容量巨大的BCR库,赋予个体识别各种抗原、产生特异性抗体的巨大潜能,这三个CDR均参与对抗原的识别,共同决定BCR的抗原特异性。

T细胞主要功能是介导细胞免疫。T细胞抗原受体(T cell receptor,TCR)是T细胞特异性识别和结合抗原肽-MHC分子的分子结构,大多数TCR由α和β肽链组成,少数T细胞的TCR由γ和δ肽链组成。每条肽链又可分为可变区(V区),恒定区(C区),跨膜区和胞质区等几部分,而α和β两条肽链的V区(Vα、Vβ)又各有三个高变区CDR1、CDR2、CDR3,其中以CDR3变异最大,直接决定了TCR的抗原结合特异性。TCR的CDR3由V、D、J三个基因编码,在淋巴细胞的成熟过程中,通过V、D、J基因的重排形成了各种重组序列片段,再加上DNA碱基的SNP、Indel突变形成了T细胞的多样性。

免疫组库测序(Immuno-Seq)是以 T/B 淋巴细胞为研究目标,以5’RACE技术扩增决定B细胞受体(BCR)或T细胞受体(TCR)多样性的互补决定区(CDR区),结合高通量测序技术,全面评估免疫系统的多样性。Immuno-Seq技术可以观察和分析T细胞和B细胞,具有较高的测序深度和特异性。在疾病监控,抗体生产,疫苗研究,健康体检等领域有广泛的应用。

抗体组库服务优势:

  1. 采用RACE技术和专门优化的PCR扩增体系与程序,降低免疫组库中基因扩增偏向性
  2. 多样化的NGS分析平台
  3. 极高的成功率与快速交付速度
  4. 完备的生物信息学分析,深度挖掘高价值信息

抗体组库应用方向:

  1. 免疫组库或抗体组库多样性分析表征健康状况
  2. 示踪抗原特异性抗体发育过程,开发人源化抗体
  3. 评价疫苗保护性能

抗体组库服务内容:
抗体组库/免疫组库测序
 

客户提供 交付内容 发货周期 价格
1-2 ml血液或提取的高质量RNA 1. NGS测序数据

2. 生物信息学数据分析结果

6-8周 咨询

 
泓迅经典案例:

免疫组库测序及生信分析

  1. 文库构建
  2. 泓迅科技对RNA提取后经5’RACE反转录并扩增建库。

  3. 文库质检
  4. 文库构建完成后,我们使用 Qubit2.0 Fluorometer 进行初步定量,稀释文库后使用 Agilent 2100 bioanalyzer 对文库进行insert size检测。符合预期后,利用Q-PCR对文库有效浓度进行准确定量(文库有效浓度高于2nM),以确保文库质量。

  5. 文库测序
  6. 检测合格后将不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求,混样后进行 Illumina Miseq/HiSeq 测序。在flow cell 中加入四种荧光标记的 dNTP、DNA 聚合酶以及接头引物进行扩增;在每一个测序簇延伸互补链时,捕获新加入每一个dNTP后就释放出来的对应荧光信号,并通过专业软件将光信号转化为测序峰,从而获得待测片段的序列信息。

  7. 数据分析
  8. 测序数据的质量评估

    • Per base sequence quality • Per Sequence Quality Scores
    抗体测序生信分析服务1 抗体测序生信分析服务2
    • Per Base Sequence Content • Per Base GC Content
    抗体测序生信分析服务3 抗体测序生信分析服务4
    • Per Sequence GC Content • Per Base N Content
    抗体测序生信分析服务5 抗体测序生信分析服务6
    • Sequence Length Distributionreads • Duplicate Sequences
    抗体测序生信分析服务7 抗体测序生信分析服务8

 
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